本发明公开了一种DNA结合蛋白的检测方法，包括如下步骤：提供待检测的DNA结合蛋白的样品溶液，在ExoIII存在的条件下进行消化反应，反应完全后得到消化液；将消化液加入到扩增体系中，在聚合酶、内切酶和扩增模板存在的情况下，进行等温扩增反应后得到扩增液；将纳米金颗粒溶液与含有第一检测探针和第二检测探针的溶液混合后进行孵育后得到纳米金检测探针溶液；将扩增液和纳米金检测探针溶液混合后对混合液进行检测，完成DNA结合蛋白的检测。这种DNA结合蛋白的检测方法，通过第一检测探针和第二检测探针与扩增产物中靶DNA的结合，使得结合了检测探针的纳米金颗粒发生聚集，导致混合液的颜色发生变化，现象直观，灵敏度较高。