本发明公开了一种微环基因载体，不含标准质粒中能关闭转基因表达的骨架DNA成分，所述微环基因载体包括：启动子、病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分以及用于表达治疗性转基因产物的转基因或转基因表达盒子。通过将病毒基因组中的负责基因表达和病毒复制的成分，克隆到载体中，得到重组的嵌合的微环基因载体。只要把少量的微环基因载体送入感染了病毒的靶细胞内，微环基因载体便可生产具有治疗性的和感染性的重组病毒，重组病毒通过感染新的靶细胞，生产新的感染性的重组病毒，最终扩散到所有的靶细胞，相对于传统的基因载体，能够高效投递到靶细胞内，具有强大、持久的治疗效果。本发明还提供上述微环基因载体的制备方法和应用。